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        當前位置 〉 信息文章 〉技術支持 〉BEX CUY 21 EDIT II的“殺手锏”使基因轉染效率達到前所未有的高度

          說到轉染,大家最先會想到的恐怕就是脂質體轉染。誠然,像293、Hela等細胞系,脂質體轉染也能達到70-80%。而,對于其他一些極嬌貴的細胞,如原代神經元,原代神經干細胞等來說,脂質體轉染不僅轉化效率很低(最高10%),而且細胞死亡率極高。那么這種情況下,研究人員就會轉而投向更加昂貴而且毒性更大的病毒包裹方法上去。經過反復的摸索,最終將轉化效率提高了,但是,細胞在后續培養中,死亡率很高,細胞自然的生理生化特性遭到破壞,無法后續實驗。這時,電穿孔方法就是那最后一根救命稻草。
          上個世紀80年代世界第一臺電轉化儀誕生。它的波形就是單向高壓方波的重復轟擊。在這種條件下,細胞死亡率極高。如小鼠精原干細胞這種脆弱的細胞就會全部死亡。


           
          所以,有些系統就整合了這兩部分功能,配備特殊試劑的電轉化儀應運而生。它延續了傳統的方波,并設定了固定的參數。的確,這種模式的誕生,較之前一種模式提高了轉化效率,降低了死亡率。但也就是這一功能,被普遍認為是“黑匣子”,因為客戶只能知道他的細胞轉染用的是幾號程序,具體參數是怎樣的,不知道!更無法優化設定參數!而且,為了提高轉化效率,每換一種或幾種細胞,就必須重新購買不同的轉染試劑,這點也是多數客戶難以接受的“霸王條款”。而離開這些特殊的轉染試劑,這個儀器基本是被實驗室閑置了。
          那么,無需特殊轉染試劑輔助,又能顯著提高轉化效率的電轉化儀的研發就成為細胞轉染的發展方向。
          1990年,BEX公司誕生。并成為日本唯一專業研發,生產電轉化儀和細胞融合儀的廠家。他公司生產的CUY21一經推出,即得到廣泛好評,已有超過2000臺的CUY21全系列轉化儀服務于全球科研工作者,并持續20多年依然在該領域保持無法逾越的高度。
          2012年10月,回顧經典,BEX再次發布具有歷程碑意義的超級多脈沖活體/細胞電轉化儀CUY21 EDIT II。該電轉化儀無需特殊試劑即可得到極高的轉染效率,尤其是極難轉的細胞系,如原代神經元的轉染,可以達到50-60%。這一突破解決了長久以來原代細胞轉染存活率低、轉化效率低下,價格昂貴的問題。因此,許多受益的學者很想了解到底是什么,徹底改變了他們對電轉化儀的認識。
          歸根結底,就是CUY21 EDIT II的“殺手锏”正反動態衰減方波脈沖模式。


           
          大家都知道,衰減指數波脈沖比方波脈沖具有更好的轉化效率,衰減指數波脈沖可以轉化具有堅硬外壁的細菌和酵母,但由于波形尖銳,如果轉染動物細胞,容易引起細胞死亡;方波脈沖轉化效率比指數波低,但波形柔和,適合轉染動物細胞,具有高存活效率,但轉化效率比較低。BEX能夠把這兩種波形技術融為一體,就是上面的動態衰減方波。我們這一年半的時間,用CUY21 EDIT II 轉化過的細胞超過百種,其中多數都是極難轉染的細胞,包括大鼠胚胎原代神經元細胞、NIH/3T3、NG108-15、raw264.7、SSC、HepG-2、N2a、PC3、LCL、NIT1、小鼠胚胎原代干細胞以及細胞系,和原代小鼠β胰島細胞團、人B細胞系、人淋巴細胞等等,達到的轉染效率我們十分欣喜。
          BEX CUY21 EDIT II 也涵蓋了其他波形。如靜態衰減脈沖,恒流脈沖。這兩種波形被指定為活體轉染脈沖模式,原因就是方波的波形柔和,而且對活體電轉來說存活率就顯得非常重要。特別是獨有的恒流脈沖,使得CUY21 EDITII 成為世界上唯一一臺可以成功轉染成年鼠腦的電轉化儀。倘若用這種模式轉染細胞,轉染效率就比動態衰減脈沖要低些。
          我有作過對比試驗,分別用動態衰減脈沖模式,靜態衰減脈沖模式和脂質體轉染方法平行對小鼠胰島瘤β細胞系進行轉染。結果很明顯:
           
          綜上所述,BEX CUY21 EDIT II 動態衰減脈沖模式最大程度的提高了轉染效率,同時保證了細胞的存活率,為極難轉染細胞的研究開辟了新的一頁。

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